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行业资讯

灌流技术助力慢病毒载体的放大生产


慢病毒载体(LV)是基因和细胞治疗应用的关键工具。如何为临床应用提供足够数量且稳定合规的载体一直是备受关注的重点和难点。慢病毒载体通常是通过多质粒瞬时转染HEK 293贴壁细胞株而产生,常规方法属于实验室密集型,需依赖质粒的供应。贴壁培养需通过增加细胞附着和生长的可用面积来放大。但由于瞬时转染中过量的质粒和转染试剂的残留,会引起终产物的污染。因此,稳定且规模化的慢病毒载体生产问题仍然亟待解决。目前一些学术和工业实验室正在开发悬浮培养工艺,希望最终实现在传统的搅拌罐中完成慢病毒载体的生产。


       在刚刚结束的2018年中国生物制品年会上,来自中国食品药品检定研究院的孟淑芳主任在比较国内外CAR-T细胞治疗产品质量控制要求中,再次重申了质粒及病毒载体生产及质量控制问题,这也同今年6月份药检所颁布的《CAR-T细胞治疗产品质量检测研究及非临床研究考虑要点》一脉相承。


       要点中关于病毒载体生产规模的说明


      事实上,为了满足临床应用和商业生产需求,应用悬浮工艺借助生物反应器生产慢病毒载体已经成为一种趋势。在近期发表的文献中,有研究者对慢病毒载体稳产HEK293悬浮细胞系的进行了工艺开发和改进。从小规模到1~3L级生物反应器具有良好的重现性和稳定性。研究评价了两种改善慢病毒载体总产量的方案,且这两种方案均在灌流模式下采用了超声波细胞过滤技术(3.5L生物反应器VS10L BioSep ,1L生物反应器VS miniBioSep ,Applikon)。总的来说,实现了总病毒滴度(TU/L每升培养液)超过1个对数的增加。尤其在灌流模式下可生产高达8 x 1010 TU / L的载体,且由于每天收获,灌流模式的所得总载体(高达8×1010 TU / L)比批处理模式多11倍。预计所开发的生产工艺很适合大规模生产和商业化制造。

(了解文献全部内容,可点击阅读原文)


      Applikon BioSep系统是一种独特的用于高密度灌流过程的细胞截留装置。它使用高频共振超声波来分离细胞,取代了传统的筛网或滤膜装置,具有传统设备的所有优点,是一种无堵塞、无污染、低剪切力、无耗材的新型灌流系统。


特点:符合cGMP要求

         易于安装和操作
         适用于任何品牌的生物反应器

         可长期连续培养(>90天)
         不易堵塞
         不损伤细胞
         高分离效率(>95%)


      BioSep可用于研发阶段(1升/天),工艺开发阶段(10-200升/天)和工业生产阶段(1000升/天)。


         


Biosep工作原理



Biosep型号选择


参考文献:

Manceur AP, Kim H, Misic V, et,al.Scalable Lentiviral Vector Production Using Stable HEK293SF Producer Cell Lines.Hum Gene Ther Methods. 2017 Dec;28(6):330-339. doi: 10.1089/hgtb.2017.086. Epub 2017 Nov 21.


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